細胞培養基常見問題，谷氨酰胺、雙抗和丙酮酸鈉的作用

　　細胞培養基常見問題，谷氨酰胺、雙抗和丙酮酸鈉的作用

　　細胞培養基是細胞培養中最基礎也是最不可缺少的環節，如果細胞狀態不好，后續試驗將無法進行。讓我們看看細胞培養基會出現的常見問題：

　　如何選用培養基?

　　參考以往論文，或咨詢細胞株供應商

　　根據實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細胞株多選RPMI-1640；肉瘤、淋巴細胞實驗，可選McCoy’s 5A；造血細胞培養可用Fischer’s培養基。

　　用多種培養基培養目的細胞，通過生長狀態、生長曲線、集落形成率等指標選擇最佳培養基。

　　美國菌種保藏中心ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數細胞的詳細資料。輸入細胞名稱就可以查詢到細胞的具體來源、培養體系和注意事項等，此外還提供專業的細胞培養指南供細胞培養者學習。此外，還可通過Expasy、DSMZ等細胞數據庫查找信息。

　　培養基要避光保存？

　　培養基瓶上都會標注避光保存，因為培養基中的某些成分遇光會產生過氧化氫，具有細胞毒性。我們在超凈臺中處理細胞時，因為時間較短，不會產生太大問題。但是長時間光照下，會造成培養基質量的下降。

　　液體培養基可以放冷凍保存嗎？

　　不可以，培養基應保存在4℃冰箱中。在-20℃下，培養基中的鹽容易析出。融化后，有的鹽可能無法重新溶解，出現滲透壓降低，顏色會變深，PH值升高。

　　培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

　　新鮮培養基中添加血清和抗生素，應在兩到三周內使用。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后開始降解。

　　培養液pH是怎樣影響細胞生長的？

　　大多數細胞適宜pH值為7.2-7.4，各種細胞對pH值要求也各不相同，原代細胞培養對PH值變動耐受差，無限細胞系耐受力強。

　　培養基中的HEPES是一種優良的生物緩沖劑，對細胞無毒性作用，能夠較長時間保持恒定的pH范圍，防止培養液pH波動較大對細胞生長產生不利的影響。

　　培養基中的NaHCO3 與二氧化碳形成緩沖系統，保持培養基PH值穩定。所有的干粉培養基都不含NaHCO3 ，加水溶解后添加NaHCO3。

　　為什么有客戶要求培養基中不含酚紅？

　　酚紅作為pH指示劑，中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。

　　但研究表明酚紅可以模擬固醇類激素（特別是雌激素）的作用，因此在涉及雌激素敏感的細胞時（如乳腺組織），最好使用不含酚紅的培養基。此外，酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測；部分無血清培養基中的酚紅會干擾鈉-鉀平衡。

　　谷氨酰胺的作用？

　　是細胞培養中所必需的一種營養元素。谷氨酰胺脫掉氨基后，可作為培養細胞的能量來源，參與蛋白質的合成和能量代謝。谷氨酰胺在溶液中很不穩定，會自發降解生成氨和焦谷氨酸，其中氨對細胞有害。

　　L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，是一種高級細胞培養添加劑，可直接替代細胞培養基中的L-谷氨酰胺。

　　雙抗的作用？

　　青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”，預防微生物污染最常用的抗生素。其中，青霉素能夠干擾細菌細胞壁的合成，對革蘭陽性菌特別有效；而鏈霉素能夠與細菌核糖體30S亞單位結合，抑制細菌蛋白質的合成，對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效，但對革蘭氏陰性菌特別有效。青霉素和鏈霉素聯合使用可以預防絕大部分的細菌污染。

　　丙酮酸鈉的作用？

　　丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。善義舉。華晨陽將持續關注疫情形勢和防控工作需要，弘揚愛心善舉，為疫情防控貢獻新力量。